吸光度值什么范围好?

题目

吸光度值什么范围好?

答案

根据比尔定律, 吸光度与试样浓度成正比, 在不同的吸光度( Absorbance,Abs) 范围内测量, 可引起不同的误差.分析工作者应予高度重视.分析样品浓度太低或浓度太高, 吸光度值超越了合适的范围, 都不会得到满意的结果.应使被分析样品的吸光度范围控制在一个合理的范围内.
试样浓度不能太低, 吸光度不能太小, 信号过小, 光度噪声的影响较大,使仪器的信噪比下降, 被测试的试样浓度下限增高和分析误差增大, 如测试黄曲霉素, 因仪器的噪声太大, 测试数据从0. 4Ab s 开始就超过1%的相对误差.
当光度噪声大到一定程度、吸光度小到一定程度时, 吸光度就根本不与样品的浓度成正比.甚至会产生试样浓度变稀时, 吸光度值反而增大( 噪声所致) ,以致无法得到稳定的测量数据.在常规分析时, 对大多数试样浓度大多取10～100μg/ ml , 相当0. 3～0. 7Abs 左右为最佳.
试样也不能太浓, 吸光度也不能太大, 如果试样的吸光度太大, 因为杂散光的原因, 使分析测试结果严重偏离比耳定律, 可能会使分析误差增大.甚至会产生试样浓度增大时, 吸光度值反而减小等反常现象.杂散光可能使分析测试结果的数据偏小, 也可能偏大; 若测试波长以外的杂散光被试样吸收则测量数据偏小, 若测试波长杂散光不被试样吸收则测量数据偏大.
在试样量允许时, 试样应选择靠近最佳吸光度值( 0. 434Ab s ) 的浓度.从理论上讲, 吸光度值为最佳值0. 434Abs 时, 分析误差最小.如果被测试样太浓时, 应向靠近0. 434Ab s 的方向稀释.在不同的吸光度上测试, 相对误差和绝对误差都不同.按照目前国际上一般高档紫外可见分光光度计给出的ΔT = ±0. 3% T, 笔者测试的结果见表6-3.测试在不同浓度或不同吸光度的相对误差列于表6-4.