做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰

题目

做Realtime PCR时同样的复孔溶解曲线有的单峰特异,有的多峰
Realtime PCR第一次做溶解曲线都是好的,后来同样的引物同样的条件和cDNA结果出来的溶解曲线却是多峰的,而且4个复孔中经常只有1、2个孔曲线特异,其他的有多峰.这是为什么,是条件不合适,还是操作有问题或者cDNA模板有问题,这跟模板浓度有关吗?

答案

可能是cDNA降解,也有可能你检测的片段表达量低,也有可能pcr mix有问题
建议多做几个复孔,选取其中的数据,或者重新设计引物