求氨基酸标准曲线 茚三酮法

题目

求氨基酸标准曲线 茚三酮法

答案

1 茚三酮配制：称0.6g茚三酮,加入15毫升正丙醇,溶解.再加入30毫升正丁醇,60毫升乙二醇,最后加入PH5.4的乙醇-乙酸钠缓冲液9毫升,混匀,4摄氏度棕色试剂瓶保存,可保存十天.
2 PH5.4的乙醇-乙酸钠缓冲液：54.4克乙酸钠加入100毫升无氨蒸馏水,加热至沸腾,使体积蒸发至60毫升左右.冷却,加入30毫升冰醋酸,用无氨蒸馏水定容至100毫升.
3 氨基酸标液：称80摄氏度烘***亮氨酸46.8毫克,用10%异丙醇定容至100毫升,为1毫摩尔/升的标准氨基酸储备液,冰箱保存.从中取5毫升,蒸馏水定容至50毫升,为5微克/毫升氨基酸标准液.
4 氰化钠储备液：称取490毫克,溶于一升无氨蒸馏水,为0.01摩尔/升.
5 10%乙酸
6乙酸-氰酸盐缓冲液：0.01摩尔/升氰化钠20毫升,用乙醇-乙酸钠缓冲液定容至一升.
7标线
管号 1 2 3 4 5 6
氨基液标液（毫升）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
无氨蒸馏水（毫升）2 1.8 1.6 1.4 1.2 1
茚三酮（毫升） 3 3 3 3 3 3
乙酸-氰酸盐缓冲液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
每管游离氨基酸含量（微克）
0 1 2 3 4 5
加完试剂后,沸水中加热15分钟,取后后迅速冷却,并不时摇动,呈现蓝紫色时,用60%乙醇定容至20毫升.摇匀,570纳米测定吸光度.
计算：
含量（微克/100克）=C*VT*100/（VS*W）
C：从标线上查得的含量 微克
VT：样品总体积 毫升
VS：测定时取用的样品体积 毫升
W：样品鲜重 克