下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有_

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaI切割，原因是_________。
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHI和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_______。
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_______酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了____。
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在____的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

答案

(1)0、2
(2)高
(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
(5)DNA连接
(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
(7)蔗糖为唯一含碳营养物质

举一反三

分析有关基因表达的资料，回答问题。
取同种生物的不同类型细胞，检测其基因表达，结果如下图。

(1)基因1～8中有一个是控制核糖体蛋白质合成的基因，则该基因最有可能是基因_____。
(2)图所示细胞中功能最为近似的是细胞_____。
A．1与6 B．2与5 C．2与3 D．4与5
(3)判断图中细胞功能近似程度的依据是____________________。
(4)现欲研究基因1和基因7连接后形成的新基因的功能，导入质粒前，用限制酶切割的正确位置是_____。

(5)下图是表达新基因用的质粒的示意图，若要将新基因插入到质粒上的A处，则切割基因时可用的限制酶是_______。

A．HindⅢ B．EcoRⅠ C．EcoB D．PstⅠ
(6)新基因与质粒重组后的DNA分子导人受体细胞的概率很小，因此需进行_______，才能确定受体细胞已含有目的基因。
(7)在已确定含有目的基因的受体细胞中，若质粒的抗青霉素基因缺失了两个碱基，将这样的受体细胞接种到含有青霉素的培养中，该细胞中可能出现的结果是______(多选)
A．抗青霉素基因不能转录 B．基因1和7没有表达 C．基因1和7不能连接 D．质粒上的酶切位置发生改变

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苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(amp^r为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。

(1)将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有______种DNA片段。
(2)图中②表示HindⅢ与BamHI酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得_____种重组质粒；如果换用BstⅠ与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得_____种重组质粒。
(3)目的基因插入质粒后，不能影响质粒的________。
(4)图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T-DNA导入植物细胞，并防止植物细胞中______对T-DNA的降解。
(5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞_______。
(6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的______基因频率的增长速率。

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采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。以下有关的叙述，正确的是

[ ]

A．人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目，等于凝血因子氨基酸数目的3倍
B．可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵
C．在该转基因羊中，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中
D．人凝血因子基因开始转录后，DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA

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(选做题)回答有关基因工程的问题：
(1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生___末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____(相同，不同)粘性末端的限制酶。
(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是_________________。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用____处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为___________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成_______，常用抗原-抗体杂交技术。如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_______中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_______上。

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拟南芥是遗传学研究的模式植物，某突变体可用于验证相关的基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色(TT)，某突变体的种皮为黄色(tt)。下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因(T_n)功能的流程示意图。

(1)与拟南芥t基因的mRNA相比，若油菜T_n基因的mRNA中UGA变为AGA，其末端序列成为“-AGGGCGACCAGAACUCUAA”，则T_n比t多编码______个氨基酸(起始密码子位置相同，UGA、UAA为终止密码子)。
(2)图中①应为_______。若②不能在含抗生素Kan的培养基上生长，则原因是___________。若③的种皮颜色为__________，则说明油菜基因与拟南芥T基因的功能相同。
(3)假设该油菜基因连接到拟南芥染色体并替换其中一个t基因，则③中进行减数分裂的细胞在联会时的基因为____________；同时，③的叶片卷曲(叶片正常对叶片卷曲为显性，且与种皮性状独立遗传)，用它与种皮深褐色、叶片正常的双杂合体拟南芥杂交，其后代中所占比列最小的个体表现为_______；取③的茎尖培养成16颗植珠，其性状通常______(填“不变”或“改变”)。
(4)所得的转基因拟南芥与野生型拟南芥________(填“是”或者“不是”)同一个物种。

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