CTAB提取植物DNA中的问题

题目

CTAB提取植物DNA中的问题
我提取的是植物的DNA,其中步骤是这样的.
1.称取材料0.2g,加入适量PVP,500µl冰冷CTAB,20µl冰冷RNA酶研磨；
2.研磨后加入500µl加热的CTAB,装入1.5ml离心管中；
3.充分混匀后,65℃水浴1h,期间不时轻缓震荡；
4.12000rpm离心10min,取750µl上清液至另一离心管中；
5.加入等体积的Tris饱和酚,摇匀后12000rpm离心10min；
6.取600µl上清液至另一离心管中,加入等体积的氯仿·饱和酚（1:1）,摇匀；
7.12000rpm离心10min,取500µl上清液至另一离心管中；
9.加入等体积氯仿·异戊醇（24:1）,摇匀后12000rpm离心10min；
9.取450µl上清液至另一离心管中,加入等体积异丙醇；
10.-20℃防止1h或室温下过夜；
11.12000rpm离心10min,倒弃上清液；70%冰冷乙醇洗涤沉淀2次；
12.倒弃上清液,风干沉淀；
14.加100µlTE溶解DNA,-20℃保存备用.
就是到第6步的时候,出现了一个比较严重的问题,就是上层清液根本就是油状的,取出来进行下一个步骤的时候上清液就很少量了.
我自己觉得有两个原因：
1.Tris饱和酚应该使用上层还是下层,还是混匀后使用?
2.离心的转速或时间是否不合理?
酚和氯仿异戊醇（25:24:1）是怎样配置的？配置的时候是将饱和酚摇匀后倾倒配置还是只取下层饱和酚溶液使用？
这个份氯仿异戊醇可以放置很久吗？还是要求现配先用？
取下层的水相使用是为什么，那就是酚氯仿异戊醇配好后也会分层是吗？

答案

Tris饱和酚分上相（tris）和下相即有机相酚,这样保存可以避免酚的挥发以及防止酚类氧化成醌,抽提时取下层酚相.在吸取的时候要将枪头插到水相以下的酚相.若吸到的是上层tris溶液,它会与我们的上清互溶.
不过一般都不会单独使用酚,而是将酚与氯仿异戊醇混合（25:24:1）取与上清等体积的混合液的下相作抽提用,一次不行可重复,然后再用氯仿异戊醇（24:1）抽提一次.
另外转速和时间,你的完全可行.