动物组织如何提取总RNA?

题目

动物组织如何提取总RNA?

答案

Trizol法
1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨；每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.
2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管,用手剧烈摇荡离心管15秒,静置5min,12,000rpm离心5min.
3、取上层水相于一新的离心管,按每1ml Trizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇,剧烈振摇使混匀,4℃,12,000rpm离心10min.
4、弃去上清液,按每1ml Trizol液加入至少1ml的比例加入70%乙醇,涡旋混匀 ,4℃×7,500rpm×5min.
5、重复以上步骤.
6、小心弃去上清液,然后室温或真空干燥5-10min,加入30μL RNase Free的水中.
7、电泳检测.