Ⅰ、斐林试剂 (检验还原糖)
①配制方法:
步骤:1、将36.4g CuSO4.5H2O溶于200mL水中;
2、用0.5mL浓硫酸酸化,再用水稀释到500mL待用;
3、取173g酒石酸钾钠KNaC4H4O6.4H2O,71g NaOH固体溶于400mL水中;
4、再稀释到500mL,使用时取等体积两溶液混合.
②试剂应用:
检验还原糖
步骤:1、向试管内注入2mL待测组织样液.
2、向试管内注入1mL斐林试剂(甲乙液混合均匀后再注入).
3、将试管放入盛有50~60℃温水的大烧杯中加热约2min.
4、观察试管中出现的颜色变化.(若能够生成砖红色的沉淀,便可以判
断还原糖的存在,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色沉淀)
Ⅱ、班氏试剂 (检验还原糖)
①配制方法:
步骤:1、400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠;
2、50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜制成CuSO4溶液;
3、把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠溶液-Na2CO3中,边加边搅,如产生沉淀可滤去.
②试剂应用:
检验还原糖
原理:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH-,与柠檬酸钠-Na2CO3溶液和CuSO4溶液混合时,Cu2+和OH-结合,生成Cu(OH)2与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀.
Ⅲ、双缩脲试剂 (检验蛋白质)
①配制方法:双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液;双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液组合而成.
②试剂应用:
检验蛋白质
步骤:1、将双缩脲试剂A加入组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境).
2、加入双缩脲试剂B,摇荡均匀.如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色.
原理:具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应.蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物.颜色深浅与蛋白质浓度成正比.
Ⅳ、苏丹溶液 (检验脂肪)
①配制方法:
步骤:1、苏丹III或苏丹IV粉0.1g;
2、取95%酒精10ml;
3、过滤后再加入10ml甘油
②试剂应用:
检测脂肪
原理:苏丹Ⅲ可将脂肪染成橘黄色,苏丹Ⅳ将脂肪染成红色.
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