怎样确定一个蛋白质中二硫键的位置

题目

怎样确定一个蛋白质中二硫键的位置

答案

二硫键位置的确定
一般用蛋白酶水解带有二硫键的蛋白质,从部分水解产物中分离出含二硫键的肽段,再拆开二硫键,将两个肽段分别测序,再与整个多肽链比较,即可确定二硫键的位置.常用胃蛋白酶,因其专一性低,生成的肽段小,容易分离和鉴定,而且可在酸性条件下作用（pH2）,此时二硫键稳定.肽段的分离可用对角线电泳,将混合物点到滤纸的中央,在pH6.5进行第一次电泳,然后用过甲酸蒸汽断裂二硫键,使含二硫键的肽段变成一对含半胱氨磺酸的肽段.将滤纸旋转90度后在相同条件下进行第二次电泳,多数肽段迁移率不变,处于对角线上,而含半胱氨磺酸的肽段因负电荷增加而偏离对角线.用茚三酮显色,分离,测序,与多肽链比较,即可确定二硫键位置.
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还有一种方法,
蛋白质中二硫键的定位及其质谱分析