蛋白表达时断裂怎么办?

题目

蛋白表达时断裂怎么办?
我融合表达一个蛋白,在E.Coli,可电泳结果总是断裂的
怎么办?

答案

1.取质粒 酶切或测序 确定基因大小/序列正确,中间没有stop codon
2.做个northern blot看看mRNA大小是否正确
3.增加培养液营养,确保蛋白表达时营养足够,核糖体不会提前脱落
4.蛋白不大可以测序,也可以做个AAA看看构成再分析问题原因