怎样从总RNA中提取mRNA?原理是什么?

怎样从总RNA中提取mRNA?原理是什么?

题目
怎样从总RNA中提取mRNA?原理是什么?
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答案
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴,寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(OligoT)可以与之配对结合,这就是提取mRNA最基本的原理.具体到实验手段上,现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用.
磁珠法一般是用生物素标记OligoT,亲和素标记磁珠(生物素和亲和素间具有高度亲和力).实验时生物素标记的OligoT与mRNA的polyA高效杂交形成复合体,此复合体又与标有亲和素的磁珠结合.用磁性分离架就可以将这堆复合物分离出来.最后用无RNase去离子水将mRNA从复合物中洗脱下来即可.
寡聚dT纤维素柱层析法的大致流程:总RNA流经寡聚dT纤维素柱时,在高盐缓冲液中,带polyA尾的mRNA被特异地结合在柱上.降低盐浓度,mRNA被洗脱.一般过两次柱后,就可得到较高纯度的mRNA.
当然有些mRNA没有polyA尾巴,这种就比较难办了,我最近的实验就是在对付这种东西.如果你是拿mRNA做RT-PCR,其实一般是不必分离mRNA的,设计好引物就可以用总RNA做了.
举一反三
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
奥巴马演讲不用看稿子.为什么中国领导演讲要看?
想找英语初三上学期的首字母填空练习……
英语翻译
1,人们染上烟瘾,最终因吸烟使自己丧命.
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