western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?
题目
western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行一抗孵育,在一抗孵育完成后为什么要清洗滤膜上的磷酸盐,磷酸盐对后续的加入二抗有什么影响?
一抗孵育完成后,我是知道洗膜的,可是《分子克隆》上说要清洗掉磷酸盐与叠氮钠,清洗叠氮钠我知道为什么,可是不知道为什么要清洗掉磷酸盐,因为在网上有不少资料在洗膜过程中是不用换掉PBS的(因PBS中含有磷酸盐),可是《分子克隆》上说要在一抗孵育完成后用TBST洗滤膜,
答案
一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体,而不是磷酸盐.只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗,加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景.至于是使用PBS(T)还是TBS(T),这要具体看你的二抗种类.PBS不适合AP系列,PBS/TBSS适合AP和HRP体系.另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合适.
举一反三
已知函数f(x)=x,g(x)=alnx,a∈R.若曲线y=f(x)与曲线y=g(x)相交,且在交点处有相同的切线,求a的值和该切线方程.
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
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