怎么通过Q-PCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果,如何通过曲线来判断结果的好与坏?

题目

怎么通过Q-PCR的扩增曲线和溶解曲线来分析结果,如何通过曲线来判断结果的好与坏?

答案

具体要看你做什么实验,模板和扩增的基因实怎样的.
1、扩增曲线：一般来说如果你做双ΔCT法那么你的扩增曲线必须是S型,有明显的四个时期,且复孔的CT值尽量一致,相差不要超过0.5个CT值（上限是1个CT值）；同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增,其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方.比如同一种CDNA5倍浓度稀释,那么同一种基因扩增的前提下,5倍浓度模板的CT值会比1倍浓度模板的CT值提前2.3个循环左右,以此类推,当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出CT值属正常现象,也可算作没有扩增）.
2、溶解曲线：溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线,顾名思义,其跟模板（或其浓度）没有关系,扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线,类似于电泳.那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间）,我说的是一般情况,这个跟扩增片段长短有关系.出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定,而基因组DNA污染的峰会在90℃以后.出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始PCR这之间的时间过长）所致；基因组DNA那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gDNA的消除工作.而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染,注意实验操作等避免模板污染.
纯手打,支持下.