荧光显微镜检测.我要做贴壁细胞 用胰酶消化?

题目

荧光显微镜检测.我要做贴壁细胞 用胰酶消化?

答案

博凌科为1．贴壁细胞 ,让细胞自己在盖玻片上爬片.操作如下：A.取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍.将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满.B.刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml固定液,固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）.C.去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体.洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次.D.加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟.也宜用摇床,或手动晃动数次.E.用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟.F.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡.使细胞接触封片液,切勿弄反.G.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核.2.悬浮细胞A.离心收集细胞样品于1.5ml离心管内,加入0.5ml固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）.B.离心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟.洗涤期间手动晃动.C.最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀.D.稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动.E.均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟.用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干.F.用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟.G.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡.H.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核.3.组织切片A.常规包埋切片后,脱腊,透明.B.PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体.洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次.可在六孔板中操作.C.加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟.也宜用摇床,或手动晃动.D.用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟.E.将切片置于载玻片上,滴一滴抗淬灭封片液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡.F.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核.