用大肠杆菌表达蛋白时,要确定是上清还是包涵体表达,为什么沉淀里的包涵体不需要用尿素溶解就可以跑电泳

用大肠杆菌表达蛋白时,要确定是上清还是包涵体表达,为什么沉淀里的包涵体不需要用尿素溶解就可以跑电泳

题目
用大肠杆菌表达蛋白时,要确定是上清还是包涵体表达,为什么沉淀里的包涵体不需要用尿素溶解就可以跑电泳
我不明白这段话中的一些意思:
“先破碎细胞,离心,沉淀和上清分别跑电泳,看看目的蛋白在包涵体中还是在裂解上清中.若在包涵体中,先洗涤包涵体,然后再用8M尿素或者6M盐酸胍溶解包涵体.”
主要想问,为什么用沉淀跑电泳可以确定目的蛋白是否在包涵体中呢?包涵体不是要溶解的吗,不溶解的话质量应该很大吧(因为包涵体里有很多蛋白),质量大的话怎么可以用电泳来确定呢?电泳的原理就是根据蛋白质量大小来将不同的蛋白分开的呀?
首先,我知道什么是包涵体。第二,我没有说质量大不可以跑电泳。第三,我知道不同种电泳的原理各不相同。我对生物技术算不上十分精通,但这点常识还是有的。
我只想问,第三点中说“上样之前,需要用上样缓冲液处理样品,处理后,包涵体也就解聚了”,为什么上样缓冲液可以让包涵体解聚?
答案
1)你应该是没有明白什么是包涵体,简单的说就是翻译的蛋白没有正确折叠而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.实际上就是很多个蛋白分子,这些蛋白并不是交联在一起的,用高浓度的尿素和盐酸胍可以使他们变性,解聚.
2)用沉淀跑电泳可以确定目的蛋白是否在包涵体?
包涵体是不溶于水的,比较总蛋白.沉淀,及上清中的诱导带就可以知道上清中有没有你想要的可溶蛋白了
3)电泳检测的话,可以用SDS-PAGE检测,在上样之前,需要用上样缓冲液处理样品,处理后,包涵体也就解聚了,每个蛋白分子与SDS结合,形成了可溶物.
4)质量大的话怎么可以用电泳来确定呢?
为什么不可以呢?DNA电泳,蛋白电泳不都可以吗?
5)电泳的原理就是根据蛋白质量大小来将不同的蛋白分开的呀?
不通种电泳的原理个不相同.SDS-PAGE可以简单的认为是根据蛋白质量来区分蛋白的.
你想不明白应该是不知道什么是包涵体,或者什么是电泳,电泳的原理,你自己还是在网上好好看看这些内容,应该不难理解.
上样缓冲液中有巯基乙醇,SDS,样品还要加热,破坏了包涵体之间蛋白的相互作用力,最好还是看看是怎么行成的包涵体吧
举一反三
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
奥巴马演讲不用看稿子.为什么中国领导演讲要看?
想找英语初三上学期的首字母填空练习……
英语翻译
1,人们染上烟瘾,最终因吸烟使自己丧命.
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