怎么证明菌种进行了传代

题目

怎么证明菌种进行了传代

答案

1.菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料,在医学领域中,诊断制品的制备,菌苗的生产、微生物致病性研究,药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具有生命活力,在传代过程中易发生变异甚至死亡,因此菌种传代与保藏是一项重要的基础工作.
2.菌种代号
 国内药品微生物检验所用的菌种代号是  CMCC（F）或 CMCC（B）  CMCC —— 中国医学菌种保藏中心  B —— 代表细菌,F ——代表真菌.金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003 大肠杆菌 CMCC(B) 44102 枯草芽孢杆菌 CMCC(B) 63501 白色念珠菌 CMCC(F)98001 黑曲霉CMCC(F) 98003 4.3传代和接种 4.3.1菌种冻干粉复苏
3.把冻干菌种管、灭菌1ml 滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支,移入接种室或净化工作台.
4.先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦 洗消毒、稍干,用75% 乙醇棉擦净,放在灭菌双碟内,待干.点燃酒精灯,将菌种管的封口一端在火焰上,烧灼红热,用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基,滴在灼热的菌种管封口一端,使骤冷而炸裂.
5.取灭菌镊子,在火焰旁,将炸裂的管口打开,放入灭菌双碟内,另取1支灭菌滴管,在火焰旁吸取营养肉汤少许,加至菌种管底部,将冻干菌搅动促使溶解,随即吸出管内菌液,分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内,并将滴管及菌种管投入消毒液内,将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养.
6.菌种斜面传代操作
7.培养基应新鲜制备,如斜面已无冷凝水者,不宜再使用.标签上注明菌种名及菌种编号.至冰箱取出的菌种斜面,应在室温放置约30分钟,待温度平衡后再移入接种室或超净工作台.
8.点燃酒精灯,用左手握住菌种斜面,将管口靠进火焰旁,右手拿接种棒后端,将接种环烧红30秒,随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼,往返通过3次.左手将管口在火焰上旋转烧灼,右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞,拨开棉塞,将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下,稍冷却再移至菌苔上,刮去少量菌苔,随即取出接种棒,并将菌种管口移至火焰旁.
9.堵上棉塞,左手将菌种管放下,取营养琼脂斜面1支,照上述操作打开棉塞,将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部,由底向上,将接种环轻贴斜面的表面曲折移动,使细菌划在斜面的表面上.
10.取出接种棒,在火焰旁将培养基管棉塞堵上,然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌.
11.菌种的培养与保存
12.大肠杆菌35~37℃培养48小时
金黄色葡萄球菌30~35℃培养48小时 枯草芽孢杆菌30~35℃培养48小时 白色念珠菌23~28℃培养7天 黑曲霉23~28℃培养7天
13.将培养物管自培养箱取出后放人冰箱（2-8℃）保存,一般 2个月转种一次.4.5菌液的制备
14.取上述培养好的菌种斜面移入接种室或净化工作台,放置室温后,用接种环取菌苔少许接种置营养肉汤中(10ml/支,已灭菌),将已接种毕的细菌管置35℃~37℃培养18~24小时,取出备用.一般于冰箱中保存可用两周.
15.取上述培养好的营养肉汤菌悬液（浓菌液）1ml,加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液混匀,为10-1,再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液1 ml加到9ml 0.9%无菌氯化钠溶液混匀,为10-2 ……以此类推,稀释至含活菌数在 50 100 个.用平板计数.
16.此稀释菌液用于试验后加阳性对照,可在一周内使用.4.7记录
17.传代和接种使用后,应做好《菌种传代接种记录》.4.7.2菌悬液制备后,应做好《菌液制备使用记录》