糖尿病是一种常见病，且发病率有逐年增加的趋势，以致西方发达国家把它列为第三号“***手”。治疗该病的胰岛素过去主要从动物(如猪、牛)中获得，自20世纪70年代遗

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糖尿病是一种常见病，且发病率有逐年增加的趋势，以致西方发达国家把它列为第三号“***手”。治疗该病的胰岛素过去主要从动物(如猪、牛)中获得，自20世纪70年代遗传工程(又称基因工程)发展起来以后，人们开始采用这种高新技术生产胰岛素，其操作基本过程如下图所示。

(1)图中基因工程的基本过程可概括为“四步曲”，即___________。
(2)图中的质粒存在于细菌细胞内，在基因工程中通常被用作____，从其分子结构可确定它是一种_____。
(3)根据碱基互补配对的规律，在______酶的作用下，把图中甲与乙拼接起来(即***)，若a段与d段的碱基序列分别是AATTC和CTTAA，则b段与c段分别是_______。
(4)细胞进行分裂后，其中被拼接起来的质粒也是由一个变成两个，两个变成四个……质粒的这种增加方式在遗传学上称为__________。目的基因通过活动(即表达)后，能使细菌产生治疗糖尿病的激素，这是因为基因具有控制________合成的功能，它的过程包括_________。

答案

(1)获取目的基因、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达
(2)运载体   环状DNA
(3)DNA连接    TTAAG、GAATT
(4)DNA扩增    蛋白质转录和翻译

举一反三

科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种。操作流程如下图，请回答：
番茄软化过程培育示意图

(1)***DNA的构建需要的工具酶有限制性核酸内切酶和__________。
(2)在构建基因表达载体时，除了要在***DNA中插入目的基因外，还需要有启动子、终止子以及_____。
(3)从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了_______合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。
(4)普通番茄细胞导入目的基因后，先要接种到诱导培养基上培养，脱分化后得到________，再转接到分化培养基上，诱导出试管后，然后进一步培养成正常植株。

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现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoRⅠ酶切后得到的DNA分子仍是l000bp，用KpnⅠ单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分子，用EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是[ ]
A．

B．

C．

D．

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在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是[ ]
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将***DNA分子导入烟草原生质体
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞

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用基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。下列叙述不正确的是[ ]
A．常用相同的限制性内切酶处理目的基因和质粒
B．DNA连接酶和RNA聚合酶是构建***质粒必需的工具酶
C．可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了***质粒
D．导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有______个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越_______________。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建***质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_________________。
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____________。
(5)为了获取***质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_______酶。
(6)***质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_________________。
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将***质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_____________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

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