SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量中,如何做好聚丙烯酰胺垂直板电泳?哪些是关键步骤?

题目

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量中,如何做好聚丙烯酰胺垂直板电泳?哪些是关键步骤?

答案

一,清洁好制胶的玻璃板,一定要尽量用去离子水冲干净,以除去肉眼可见或不可见的杂质
二,根据你目的蛋白的分力量,选择合适的分离胶和浓缩胶
三,如果要获得最佳的胶图,可以一直使用恒流直至电泳结束,但要根据实际情况,不能把电流设置过小,防止电泳时间过长,蛋白在胶上会弥散,也不能设置太大,这样产热的原因,胶在局部位置可能会融化
四,蛋白尽量选择在胶中间的泳道上样,避免边缘效应
五,上样体积不宜过大,以上样孔1/3体积为最宜,相邻泳道最好保持体积一致
最后,如果你使用bio-rad等商业化电泳体系,自动忽略以上