CTAB法提取DNA的原理,

题目

CTAB法提取DNA的原理,

答案

CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.x0dCTAB提取缓冲液的经典配方x0dTris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏；x0dEDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性；x0dNaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,在于液相中； CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离；x0dβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除x0dPVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合,有效去除多糖.x0d使蛋白质变性,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.x0d使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用.缺点：1.能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA.2.不能完全抑制RNase的活性.x0d氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层.x0d最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚.（酚易溶于氯仿中）x0d异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡.异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生.另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定.x0d用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀.x0d简言之,无论哪种抽提方法,药品的作用基本都是一样的