免疫PCR的基本原理和大致流程是什么

题目

免疫PCR的基本原理和大致流程是什么

答案

博凌科为-为你免疫-PCR主要由两个部分组成.第一部分是类似于普通酶联免疫吸附实验（ELISA）的抗原抗体反应.第二部分即常规的PCR扩增和电泳检测.免 疫-PCR与ELISA的区别就在于ELISA是以碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶来标记抗体,用颜色反应来表明阳性或阴性结果,而免疫-PCR 则是以一段特定的双链或单链DNA来标记抗体,用PCR扩增抗体所连接的DNA,并进行电泳检测,因此可由PCR产物的量来反映抗原分子的量.由于PCR 的高扩增能力,只要存在着极微量的抗原抗体反应,PCR都能大量扩增抗体所连接的DNA分子,再用电泳来表明实验结果.免疫-PCR的关键之处就在于用一 个连接分子将一段特定的DNA连接到抗体上,在抗原和DNA之间建立相对应关系,从而将对蛋白质的检测转变为对核酸的检测.最初Sano等人建立的免疫 -PCR实验流程如下：（1）再包被缓冲液稀释抗原BSSA,并固定在微滴定板上.（2）微滴定板上加入相应的已稀释的单克隆抗体,并洗去未结合的抗体分 子.（3）加入稀释的已与生物素化PUC19的结合的链亲和素-蛋白A嵌合体（蛋白A能与抗体结合,而链亲和素可与生物素化PUC19中的生物素结合）, 并洗去未结合的嵌合蛋白-Puc19复合物.（4）PCR扩增抗体所连接的Puc19.（5）琼脂糖凝胶电泳,EB 显色检测Puc19. 运用这种方法,Sano等人可检测到600个BSA抗原分子.与用碱性磷酸酶作为标记物的ELISA方法相比,免疫-PCR的敏感度比 ELISA高106.在这免疫-PCR系统中,链亲和素-蛋白A嵌合体作为一个连接分子起着桥梁作用.它的两个独立结合位点蛋白A和链亲和素分别与IgG 的Fc段和生物素化DNA中的生物素结合,从而在蛋白质和核酸之间建立对应关系,通过PCR扩增,将抗原抗体反应的特异性高度放大.因此,免疫-PCR结 合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高度敏感性,成为一种极为敏感的抗体依赖的抗原检测技术.