什么是双波长比色原理

题目

什么是双波长比色原理

答案

1 双波长分光光度法的原理
双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的,它的理论基础是差吸光度和等吸收波长.它与传统分光光度法的不同之处,在于它采用了两个不同的波长即测量波长（又叫主波长λp,Primary Wavelength）和参比波长（又叫次波长λs,Second Wavelength）同时测定一个样品溶液[1,2],以克服单波长测定的缺点,提高了测定结果的精密度和准确度.
早期的双波长分光光度计在测定时,两束不同波长的单色光经斩光器（Chopper,一种用于双波长分光光度计中使光束按一定周期反射,遮断或通过的装置）处理后,以一定的时间间隔交替照射[1]比色杯,经待测溶液吸收后,再照到光电管上,产生两个不同的吸光度,再将这两个吸光度相减,就得到了差吸光度ΔA.根据Lamber—Beer定律,
得：
Aλ p=ελpLC+Ap (1)
A λs=ελsLC+As (2)
式中 Aλ p 、 A λs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的吸光度,ελp 、 ελs—分别为待测溶液在主波长和次波长处的摩尔吸光系数
L—光径
C—待测溶液的浓度
Ap 、As—分别为待测溶液在主波长和次波长处的散射或背景吸收
当λp 、λs相差不太大时,由同一待测溶液产生的光散射吸光度和背景吸光度大致相等,即Ap＝A s,将（1）式－（2）式得：
Aλ p－A λs＝ΔA＝（ελp－ελs）LC （3）
对于同一待测溶液来说,ελp－ελs是一常数K,在光径L不变的情况下,（3）式可简化为：
ΔA＝KC （4）
（4）式说明,待测溶液在λp与λs两个波长处测定的差吸光度ΔA与试样中待测物质的浓度C成正比.这就是双波长法赖以建立的定量公式〔1,3〕.
双波长差吸光度法具有可以克服溶液浑浊的影响、共存组分吸收谱线叠加的干扰,以及减少比色杯的光学不均一等优点.它的差吸光度在2.5以内时,线性范围良好.