请问硫酸铵沉淀的方法是什么?

题目

请问硫酸铵沉淀的方法是什么?

答案

硫酸铵可能会损坏某些蛋白.加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀.
对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析.
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效.
沉淀所需溶液：
饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解）.
1M Tris-HCl,pH 8.0
用于第一步纯化的缓冲液.
方法：
1,过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）.
2,每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以维持pH值.
3,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度.搅拌1小时.
4,10000g离心20min.
5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次.再次离心.
6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀.
7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去.