试述革兰染色法的步骤,结果及其临床意义

题目

试述革兰染色法的步骤,结果及其临床意义

答案

一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：1）涂片固定.2）草酸铵结晶紫染1分钟.3）自来水冲洗.4）加碘液覆盖涂面染约1分钟.5）水洗,用吸水纸吸去水分.6）加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分.7）蕃红染色液（稀）染1分钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.
具体试验 流程
1、 取载玻片用纱布擦干,载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）.涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂. 2、 涂片：液体培养基：左手持菌液试管,在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环,在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌.固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水,再用接种环取少量菌体,涂在载玻片上,使其薄而均匀. 3、 晾干：让涂片在空气中自然干燥. 4、 固定：让菌膜朝上,通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）. 5、 染色：将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液,染1min. 6、 水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液,用吸水纸吸干.简单染色结束可观察细胞形态. 7、 媒染：滴加1滴碘液,染1min,水洗. 8、 脱色：吸去残留水,连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色,立即水洗. 9、 复染：滴加蕃红复染3-5min,水洗.至此,革兰氏染色结束.


结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色.


其重要的临床意义在于：1.鉴别细菌 2.选择药物 3.与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素；而内毒素主要是指革兰氏阴性菌胞壁成分中的脂多糖,两者的致病作用不同.