细胞核分离实验的原理是什么?

题目

细胞核分离实验的原理是什么?
有什么相关的理论学说?
该注意的是什么?
有什么实际应用?
实验预计的弊端和难点是什么?

答案

差速离心（differential centrifugation）
在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心,用于分离不同大小的细胞和细胞器.
在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体.
由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠,而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中,一般重复2～3次效果会好一些.
差速离心只用于分离大小悬殊的细胞,更多用于分离细胞器.通过差速离心可将细胞器初步分离,常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化.
速度逐渐提高,样品按大小先后沉淀