454的测序原理是什么?

题目

454的测序原理是什么?

答案

答：454测序原理：焦磷酸测序依靠生物发光进行DNA序列分析的新技术；在DNA聚合酶,ATP硫酸化酶,荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号释放偶联起来.通过检测荧光信号释放的有无和强度,就可以达到实时测定DNA序列的目的.此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针,也不需要进行电泳；具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点.x0dRoche GS FLX System是一种基于焦磷酸测序原理而建立起来的高通量基因组测序系统.在测序时,使用了一种叫做“Pico TiterPlate”（PTP）的平板,它含有160多万个由光纤组成的孔,孔中载有化学发光反应所需的各种酶和底物.测序开始时,放置在四个单独的试剂瓶里的四种碱基,依照T、A、C、G的顺序依次循环进入PTP板,每次只进入一个碱基.如果发生碱基配对,就会释放一个焦磷酸.这个焦磷酸在各种酶的作用下,经过一个合成反应和一个化学发光反应,最终将荧光素氧化成氧化荧光素,同时释放出光信号.此反应释放出的光信号实时被仪器配置的高灵敏度CCD捕获到.有一个碱基和测序模板进行配对,就会捕获到一分子的光信号；由此一一对应,就可以准确、快速地确定待测模板的碱基序列.