筛选产β-半乳糖苷酶的菌种

题目

筛选产β-半乳糖苷酶的菌种
具体的培养基配方,
ONPG要怎么加,什么时候加!

答案

1.平板筛选培养基：胰蛋白胨15g,蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏1g,NaCl 5g,琼脂15g,X-gal0.1g,蒸馏水1 000ml,pH 7.7.2.
2.摇瓶筛选培养基：乳糖1%,胰蛋白胨15g,豆蛋白胨5g,K2HPO4 2.5g,酵母浸膏3g,NaCl 5g,蒸馏水1000ml,pH 7.7.2.
3.酶活力测定方法
将pH6.5的磷酸缓冲液500μl和0.25%的ONPG 200μl加入比色管,在25℃的温度下温浴5min,加入适当稀释的粗酶液0.5ml,反应10min,加入800μl 5%Na2CO3终止反应,蒸馏水定容至10ml,用分光光度计420nm测定OD值,通过标准曲线方程计算酶活.
在上述条件下1ml粗酶液1min催化水解ONPG生成1μmol邻硝基苯酚(ONP)的量,定义为1U.