PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么

题目

PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么
前几次做的结果都挺好的,条带很清楚,亮度也可以,就是不太齐,但是最近几次几乎没有目的带,都是弥散的,从头到尾,我用的东西都是一样的,条件也没变,但是就是跑不出来,这是为什么?mark跑得很好,应该不是电泳的问题,

答案

首先怀疑,特异性不好,解决办法：
1,可能是模板量过高,降低模板浓度10-1000倍；
2,适当提高退火温度1-3度,或者先用高于你以往退火温度的1-3度先p上5个循环,再用先前温度p剩余的循环（也就是在程序中多设置2步）；
3,稍降Mg离子浓度,如果以前加1.5ul的,试试1-1.2ul；
如果以上方案还不能解决,就要检查你的模板、引物和taq,重新提模板、重新稀释引物,以及用新的pcr试剂.
欢迎继续讨论,纯属手打,祝实验顺利!