制备和应用固相化酶

多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性．解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：  [     ]
A．变性过程中破坏了DNA分子内碱基对间的氢键，也可利用解旋酶实现
B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

下面甲图中DNA决定某一多肽链中的酪氨酸和丙氨酸过程示意图，乙图示样品DNA经PCR技术(聚合酶链式反应)扩增，可以获取大量DNA克隆分子。分析回答：
(1)甲图中含有___________种核苷酸；丙氨酸的遗传密码子是__________。该图表示了DNA中遗传信息的__________过程。
(2)有一种贫血症是血红蛋白分子的一条多肽链上，一个酪氨酸被一个苯丙氨酸所替代造成的。此种贫血症的根本原因是_______________，即_____________发生了改变。
(3)乙图的“PCR”与人体内的DNA复制相比有何特殊之处?_________________________________。
(4)现在要通过“PCR”得到甲图中DNA片段的1024个克隆片段，则至少要向试管中加入___________个腺嘌呤脱氧核苷酸。

下列关于DNA聚合酶催化合成DNA子链的说法中，正确的是

[     ]

A．以DNA为模板，使DNA子链从5′端延伸到3′端的一种酶
B．TaqDNA聚合酶必须在每次高温变性处理后再添加
C．TaqDNA聚合酶能特异性地复制整个DNA的全部序列
D．TaqDNA聚合酶是从深海生态系统中发现的

PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段；电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖 凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子鉴定。下图是电泳装置和电泳结果：
(1)与电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是__________，叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是_______________。
(2)PCR技术能把某一DNA分子片断进行扩增。依据的原理是____________。
(3)图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，故可推知该多肽由___________种氨基酸构成。
(4)图4通过提取某小孩和其母亲，以及待测定的四位男性的DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱，请分析：F₁～F₄中，谁是该小孩真正生物学上的父亲？为什么？__________________，______________________。

关于PCR的说法不正确的是： [     ]
A．PCR是体外复制DNA的技术
B．PCR过程中需要一个模板DNA、两个引物分子、大量脱氧核苷酸原料
C．Taq酶是一种热稳定的DNA聚合酶
D．PCR利用的是DNA双链复制原理

PCR技术扩增DNA，需要的条件是
①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶等 ⑤mRNA ⑥核糖体[     ]
A．①②③④
B．②③④⑤　
C．①③④⑤
D．①②③⑥

利用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件不包括 [     ]
A．目的基因
B．活细胞
C．DNA聚合酶
D．引物

多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：

[     ]

A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现
B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

PCR技术（聚合酶链式反应）是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，下图表示合成过程，请据图分析回答：

(1)A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确的是_________
A．该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键 B．该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键 C．该过程不需要解旋酶的作用 D．该过程与人体细胞的过程完全相同
(2)C过程要用到的酶是________。这种酶在高温下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以_________加入，不需要再添加。PCR反应除提供酶、DNA模板、通过控制温度使DNA复制在体外反复进行外，还需要满足的基本条件有：__________________________________
(3)如果把模板DNA的两条链用¹⁵N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制"94℃-55℃-72℃”温度循环3次，则在形成的子代DNA中含有¹⁵N标记的DNA占________________。
(4)如果模板DNA分子共有a个碱基对，其中含有胞嘧啶m个，则该DNA复制10次，需要加入胸腺嘧啶脱氧核苷酸______________个。
(5)PCR中由碱基错配引起的变异属于_______________。假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占_______________

有关PCR技术的说法，不正确的是 [     ]
A．PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术
B．PCR技术的原理是DNA双链复制
C．利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列
D．PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA

在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是

[     ]

A．用mRNA为模板逆转录合成DNA
B．以4种脱氧核苷酸为原料人工合成
C．将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选
D．先建立基因文库，再从中筛选

下列关于生物技术实践的叙述中，错误的是

[     ]

A．加酶洗衣粉中添加的酶包括纤维素酶、脂肪酶、淀粉酶和碱性蛋白酶等
B．与斐林试剂检测相比，用尿糖试纸检测尿液中的葡萄糖，特异性更强、灵敏度更高
C．利用PCR技术扩增目的基因时，引物Ⅰ和引物Ⅱ的碱基序列应互补
D．腐乳制作过程中，添加料酒、香辛料和盐，均可以抑制杂菌的生长

红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临床上使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的***人红细胞生成素(thEPO)，其简要生产流程如下图。请回答：
(1)图中①所指的是_________技术。
(2)图中②所指的物质是_________，③所指的物质是______________。
(3)培养***CHO细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换________。
(4)检测thEPO的体外活性需用抗thEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的________细胞，可由thEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。

(选做题)为了实现燃料供应来源多样化，发展长期替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等已经列入了我国未来10年的发展计划。
　　广东省是我国甘蔗的主产区之一。甘蔗是一种高光效的C₄植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母发酵→蒸馏→成品(燃料酒精)请根据上述材料，回答下列问题：
(1)简述甘蔗大规模快速繁殖技术的过程。
(2)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意_____和_____，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。
步骤4：根据_______筛选出突变菌。
(3)上述步骤2、3和4的依据分别是_________________。
(4)利用获得的突变菌和蔗汁进行酒精发酵实验，除了将培养基灭菌、保持空间洁净外，发酵过程中防止外来杂菌入侵还有哪些可行方法？(列举两种)
(5)甘蔗榨汁以后还有大量的蔗渣废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是其___________。请提出解决该问题的方法。(列举两种方法)
(6)突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物和DNA聚合酶的作用分别是什么？

PCR技术是一种DNA扩增技术，所需的酶来自于[     ]
A．酵母菌
B．大肠杆菌
C．Taq细菌
D．病毒

下列说法不正确的是[     ]
A．一条DNA母链只有一个3′端，即羟基末端
B．DNA的两个3′端位于相反的两端
C．TaqDNA聚合酶只能与引物的3′端结合并延伸子链
D．DNA的合成方向是从子链3′端向5′端延伸的

PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时将

[     ]

A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸
B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸
C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸
D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链

标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是[     ]
A．92℃，50℃，72℃
B．72℃，55℃，94℃
C．55℃，94℃，72℃
D．80℃，55℃，72℃

PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水在使用前必须进行的关键步骤是

[     ]

A．反复洗涤
B．用酒精擦洗
C．高压灭菌
D．在-20℃储存

使用PCR仪的具体实验操作顺序应为
①设计好PCR仪的循环程序 ②按配方准备好各组分 ③用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分 ④进行PCR反应 ⑤离心使反应液集中在离心管底部

[     ]

A．②③⑤④①
B．①⑤③②④
C．②③⑤①④
D．④②⑤③①

在DNA扩增过程中，DNA片段经若干次扩增，与其数目的理论值变化相符的图是[     ]

A．
B．
C．
D．

PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是
①PCR过程需要的引物是人工合成的DNA单链 ②PCR过程不需要DNA聚合酶 ③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 ④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制[     ]
A．①④
B．①③
C．②③
D．②④

PCR的含义是

[     ]

A．亲子鉴定技术
B．多聚酶链式反应
C．DNA片段复制
D．DNA序列测定

下列不属于PCR技术优点的是[     ]
A．简单，易于操作
B．可以完全无限制地扩增
C．实用性强，灵敏度高
D．快速、高效，并可自动化

在基因工程中，把选出的目的基因(共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个)放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少是

[     ]

A．640
B．8100
C．600
D．8640

在PCR扩增实验中，加入一种提取物(一种模板DNA片段)，但实验得到的产物却有两种DNA。其原因可能是

[     ]

A．基因突变
B．TaqDNA聚合酶发生变异
C．基因污染
D．温度过高

下列关于PCR引物的说法，不正确的是

[     ]

A．引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补，并能引导模板DNA的互补链合成的(脱氧)核苷酸序列
B．引物常根据需要扩增的目标DNA的碱基序列用化学合成的方法获得
C．DNA聚合酶只能使DNA链从引物的3′端开始向引物的5′端延伸
D．引物的3′端必须具有游离的―OH基团

如图表示DNA变性和复性示意图，下列相关说法不正确的是
[     ]
A．向右的过程为加热(80～100℃)变性的过程
B．向左的过程为缓慢冷却复性的过程
C．变性与在生物体内解旋过程的条件、实质都相同
D．图中DNA片段共有2个游离的磷酸基和2个3′端

在PCR扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中
①模板DNA ②模板RNA ③DNA解旋酶 ④耐高温的DNA聚合酶 ⑤引物 ⑥PCR缓冲液 ⑦脱氧核苷酸贮备液 ⑧核糖核苷酸贮备液[     ]
A．①④⑤⑥⑦
B．①③④⑤⑥⑧
C．②③④⑤⑥⑦
D．①④⑥⑦⑧

在实验室中，做PCR通常使用的微量离心管是一种薄塑料管，此过程能否使用玻璃离心管及原因分别是

[     ]

A．能，玻璃离心管、塑料微量离心管都可以使用
B．不能，玻璃离心管易碎，不安全
C．不能，玻璃离心管一般较大，不适合做微量离心管
D．不能，玻璃离心管容易吸附DNA

下图表示在生物体外获取DNA(或目的基因)的两种方式。
图一示经PCR技术扩增获取DNA的过程。图二示反转录形成DNA的过程。
请据图分析回答：
(1)图一中的DNA聚合酶的化学本质是______，它与人体内的DNA聚合酶相比具有______特性。
(2)图一A中的DNA解链过程在人体内可由________催化完成。C过程复制方式的特点是________，该过程需要_______和能量等基本条件。
(3)图二E中的碱基互补配对方式与图一C中的不同之处是________________。假设图一中的一个模板DNA分子中有800个碱基对，其中含有腺嘌呤600个，若通过PCR技术共消耗周围环境中游离的胞嘧啶脱氧核苷酸6200个，则该模板DNA在PCR扩增仪中已经复制了____次。

将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
请根据上面的图和表回答下列问题。
(1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是__________。
(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表中所示为根据模板设计的两对引物序列，图示为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？_________。

在PCR实验操作中，下列说法不正确的是

[     ]

A．在微量离心管中添加各种试剂时，只需要一个枪头
B．离心管的盖子一定要盖严，防止液体外溢
C．用手轻弹离心管壁的目的是使反应液充分混合
D．离心的目的是使反应液集中在离心管底部，提高反应效果

在PCR扩增DNA的实验中，根据设计，一分子DNA经30次循环后，应得到230个DNA分子，但结果只有210个DNA分子。出现该现象的原因可能是
①循环次数不够 ②TaqDNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制 ③引物不能与模板链结合 ④系统设计欠妥

[     ]

A．①②③
B．②③④
C．①③④
D．①②③④

某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中，发现了一种冰冻的已灭绝的巨大动物的肌肉。他想了解该巨大动物的DNA与现今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下检测工作。其中正确的操作步骤及顺序是
①降低温度，检测处理后的杂合DNA双链 ②通过PCR技术扩增巨大动物和大象的DNA ③把巨大动物的DNA导入大象的细胞中 ④在一定温度条件下，将巨大动物和大象的DNA水浴共热

[     ]

A．②④③
B．②④③①
C．③④①
D．②④①

PCR利用了DNA热变性的原理，PCR仪实际上也是一种能自动调控温度的仪器，对PCR过程中“温度的控制”的说法错误的是[     ]
A．酶促反应需要高的温度，是为了确保模板是单链
B．延伸的温度必须大于复性温度，而小于变性温度
C．DNA聚合酶具有耐高温的能力
D．DNA解旋酶具有耐高温的能力

下列属于PCR技术的条件的是
①稳定的缓冲溶液环境 ②DNA模板 ③合成引物 ④四种脱氧核苷酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥DNA解旋酶 ⑦温控设备

[     ]

A．①②③④⑤⑥
B．①②③④⑤⑥⑦
C．③④⑤⑥⑦
D．①②③④⑤⑦

“DNA指纹技术”可用于亲子鉴定，亲子鉴定所检测的“遗传因子”都是符合孟德尔遗传规律的，并以此进行评判。
(1)理论上，在鉴定中只要出现排除指标并且充分排除基因突变的可能，就可以以此作出排除存在亲缘关系的结论。下列争议父亲A、B、C、D四人中，可完全排除孩子的生物学父亲的是_____。(说明：下划线字体表示来自父亲的遗传因子。无下划线字体表示来自母亲的遗传因子)
(2)下图为通过提取某小孩和其母亲以及待测定的三位男性的DNA，分别由________酶处理后，生成含有若干DNA片段，并已进行______扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱示意图，则该小孩的真正生物学父亲是________。
(3)试问：PCR技术与人体内DNA复制相比有何特殊之处？___________________。
(4)2002年6月，我国第一张18位点的“基因型身份证”在湖北武汉诞生。
①．现行居民身份证具有一定时效性(有效期)如10年、20年不等，“基因型身份证”是否如此？______，说明理由：____________________。
②．是否存在两个人的“基因型身份证”完全相同的情况？___________________。

近十年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图所示)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。
(1)加热使DNA双链打开，这一步是打开______键，称为______，细胞中氢键是在_____的作用下断裂的。
(2)当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成2条DNA分子，此过程中原料是___________，遵循的原则是__________________。
(3)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件，即：液体环境、适宜的___________和___________。
(4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，若将一个用¹⁵N标记的DNA分子放入试管中，以¹⁴N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次后，则¹⁵N标记的DNA分子占全部DNA总数的比例为_______。

关于PCR技术的说法不正确的是[     ]
A．PCR是体外复制DNA的技术
B．PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列
C．PCR过程中只需要两种引物分子
D．PCR依据的是DNA双链复制原理

聚合酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如下图所示。下列关于PCR技术叙述不正确的是
[     ]
A．PCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术
B．反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板
C．PCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增
D．应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变

请回答下列关于微生物的问题：
(1)“闻着臭，吃着香”的臭豆腐驰名中外，其制作过程中所用的微生物主要是_______________。在制作过程中，加盐的作用是____________________。臭豆腐表面往往有一层致密的皮，这层皮实际上是微生物的__________，它对人体是无害的。
(2)欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入有机磷农药制成__________培养基进行分离；若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是_____________。
(3)Taq细菌1966年被发现于美国黄石国家公园，它的发现促成了PCR技术的自动化，这是因为它为PCR技术提供了_________。PCR技术是DNA循环复制的过程，每次循环可以分为__________________三步。
(4)微生物培养过程中，除考虑菌体生长的条件(_______________)外，还要防止外来杂菌的入侵，所以要灭菌，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是___________________，对培养基则用_____________。

下列关于生物技术实践的叙述中，错误的是

[     ]

A．加酶洗衣粉中添加的酶包括纤维素酶、脂肪酶、淀粉酶和碱性蛋白酶等
B．与斐林试剂检测相比，用尿糖试纸检测尿液中的葡萄糖，特异性更强、灵敏度更高
C．利用PCR技术扩增目的基因时，引物Ⅰ和引物Ⅱ的碱基序列应互补
D．腐乳制作过程中，添加料酒、香辛料和盐，均可以抑制杂菌的生长

下列关于PCR的描述，不正确的是[     ]
A．PCR技术的原理是DNA复制
B．是酶促反应，需耐高温的解旋酶和DNA聚合酶
C．一个DNA片段经PCR扩增，可形成2n个DNA片段(n代表循环次数)
D．PCR利用了DNA的热变性来控制DNA的解聚与结合

聚合酶链式反应(PCR技术)是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA的生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量的4种脱氧核苷酸及ATP等。反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如图所示。

(1)某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它的一条单链上碱基A：G：T：C=1：2：3：4，则经过PCR仪五次循环后，将产生个______DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸的数量至少是__________个。
(2)分别以不同生物的DNA样品为模板合成的各个新DNA之间存在差异，这些差异是_____________。
(3)由于DNA上的“遗传因子”基本都是符合孟德尔的遗传规律的，因此人类可以利用PCR技术合成的DNA进行亲子鉴定，其原理是：首先获取被测试者的DNA，并进行PCR扩增，取其中一样本DNA用限制性内切酶切成特定的小片段，放进凝胶内，用电泳推动DNA小片段分离，再使用特别的“探针”去寻找基因。相同的基因会凝聚在一起，然后利用特别的染料在X光下，便会显示由DNA探针凝聚于一起的黑色条码。每个人的条码一半与其母亲的条码吻合，另一半与其父亲的条码吻合。
①．限制性内切酶能将DNA样品切成特定的小片段，这主要体现了酶的________。
A．专一性 B．高效性 C．多样性 D．作用条件温和
②．2002年6月，我国第一张18位点的“基因身份证明”在湖北武汉诞生。人的“基因身份证明”是否终身有效？_______，理由是_________。
(4)请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处：①．___________。②．__________。③．__________。

T-DNA可随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植株形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子(称为T₁代)。
(1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除_____，因为后者产生的____会抑制侧芽的生长。
(2)为筛选出已转化的个体，需将T₁代播种在含_____的培养基上生长，成熟后自交，收获种子(称为T₂代)。
(3)为筛选出具有抗盐性状的的突变体，需将T₂代播种在含____的培养基上，获得所需个体。
(4)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与____植株进行杂交，再自交____代后统计性状分离比。
(5)若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性____。
(6)根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取__________植株的DNA，用限制酶处理后，再用__________将获得的DNA片段连接成环(如下图)，以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_________作为引物进行扩增，得到的片段将用于获取该基因的全序列信息。

聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述30多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性(引物与DNA模板链结合)→72℃下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是[     ]
A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现
B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D．PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高

PCR技术扩增DNA，需要的条件是
①目的基因 ②引物 ③四种脱氧核苷酸 ④DNA聚合酶 ⑤mRNA ⑥核糖体[     ]
A．①②③④
B．②③④⑤
C．①③④⑤
D．①②③⑥

在基因工程中，把选出的目的基因(共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个)，放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是

[     ]

A．540个
B．7560个
C．8100个
D．17280个

近十年来，PCR技术(聚合酶链式反应)成为分子生物学实验室的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图所示)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。
(1)加热使DNA双链打开，这一步是打开_____键，称为______，在细胞中是在______酶的作用下进行的。
(2)当温度降低时，引物与模板末端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成两个DNA分子，此过程中原料是__________，遵循的原则是_________________。
(3)“PCR”技术的必需条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的______和______。
(4)通过“PCR”技术使DNA分子大量复制，若将一个用¹⁵N标记的DNA分子放入试管中，以¹⁴N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制4次之后，则¹⁵N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例为______。