双缩脲法与folin酚法测定蛋白含量的准确性的如何?

题目

双缩脲法与folin酚法测定蛋白含量的准确性的如何?

答案

folin酚试剂法测定蛋白质含量是最灵敏的方法之一.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度.这两种显色反应产生深蓝色的原因是：在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物.Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）.在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比.
这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多.缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多.对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰folin-酚反应（Lowry反应）.
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法.双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制.当底物中含有肽键时（多肽）,试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色.可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm.鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml.