做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
题目
做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
答案
你说的应该是real time PCR吧,注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写,和real time一定要分开来.
常说的qPCR,qRT-PCR,都是通过实时(real time)的方法,测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢,由于之前RNA提取、反转等步骤,各个步骤存在不同的效率,ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量,因此,需要一个内参来做为参考.
比方说,A基因的ct值,在a样品中是18,在b样品中是20,由于a b样品存在RNA质量等等一系列不同,你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍.
这时候,我们需要一个内参,假如内参ct值在a样品中是14,而在b样品中是15.由于内参的稳定性,在不同样品中被认为是表达量一致的,因此,A基因的在ab样品之间的-ΔΔct值是1,也就是表达量为2倍的关系.
这里,我们可以知道内参的作用,即通过测量内参,可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化.内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因,这就是为什么内参经常选择看家基因的原因.以小鼠为例,常用的内参有actin gapdh hprt等等.
当然,现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同,例如gapdh,在线粒体含量高的组织中丰度高,很多人认为用基因组DNA做内参会更加靠谱,当然这是后话了,选择gapdh无碍于现阶段的实验,如果觉得不靠谱,可以选择两个内参.
你所研究的物种,应该有人已经发表过相应的内参,直接上数据库搜就可以了.
原创内容,码字不易,万望采纳.
举一反三
已知函数f(x)=x,g(x)=alnx,a∈R.若曲线y=f(x)与曲线y=g(x)相交,且在交点处有相同的切线,求a的值和该切线方程.
我想写一篇关于奥巴马的演讲的文章,写哪一篇好呢?为什么好
最新试题
- 解方程:2(x-3)(x+5)=x²+ (x-2)(x+2)和(-4x-5)²=(-2x+3)(-2x-3)-2(2x+3)(-3x+5)
- 分式乘方的问题!
- 已知函数f(x)=-根号3sin^2x+sinxcosx.(2)求函数f(x)在(0,π/2)上的值域
- 恒温器能控制熨斗温度的原理:
- 为什么当家庭电路连接处接触不良时会使该处的电阻变大?造成局部过热而引发火灾?接触不良是断路啊,
- 已知α为第二象限角,sinα+cosα=根号3/3,则cos2α=
- 难过的英语单词是什么?
- 在一个底面直径10厘米,高9厘米的圆柱形量杯内,水面高7厘米,把一个小球浸在水里,水满后还溢出6.28克,
- 现要配制溶质质量分数为百分之25的氢氧化钠溶液300克,需要氢氧化钠和水多少克
- 已知一对外啮合标准直齿圆柱齿轮传动的标准中心距a=150mm,传动比i=4,小齿轮齿数z1=20,试确定这对齿轮的模数m和大齿数的齿数z1,分度圆直径d1及d2,齿顶圆直径da1及da2,齿根圆直径d
热门考点