下图是生产转基因抗虫棉技术的流程图。已知卡那霉素抗性基因(kanR)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是[

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下图是生产转基因抗虫棉技术的流程图。已知卡那霉素抗性基因(kanR)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是

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A．为了防止黏性末端任意连接，可将抗虫基因和质粒均用两种限制酶进行处理
B．为检测抗虫基因是否成功表达，将“离体棉花叶片组织”放在含卡那霉素的培养基上培养
C．卡那霉素抗性基因(kan^R)中不可能存在限制酶的酶切位点
D．生产抗虫棉的整个过程中只需要基因工程操作即可

答案

举一反三

如图表示细胞膜上乙酰胆碱(一种神经递质)受体基因的转基因技术操作过程，相关分析正确的是

[ ]
A．获得该mRNA的最佳材料是受精卵
B．完成过程①②必不可少的酶分别是反转录酶、DNA聚合酶
C．构建基因表达载体最可能使用的载体是大肠杆菌
D．导入目的基因的方法为显微注射法

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利用苏云金芽孢杆菌的抗虫基因培育的抗虫棉是否成功，最好检测[ ]
A．是否有抗生素产生
B．是否有目的基因转录
C．是否有抗虫的性状出现
D．是否能分离到目的基因

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降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个核苷酸的DNA 单链，两条链通过18 个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如图。

在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：
(1)Klenow酶是一种________ 酶，合成的双链DNA 有________ 个碱基对。
(2) 获得的双链DNA 经EcoR Ⅰ(识别序列和切割位点-G↓AATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-G↓GATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①．大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它______________________。
②．将该目的基因导入大肠杆菌常用的方法是______________________。
③．设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是_________________________。
④．要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有______________。
⑤．在进行DNA测序时采用的方法是______________。经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是__________________。
(3)上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是_______________。

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

请回答：
(1)进行过程①时，需用______ 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为_________。
(2)进行过程e时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，如let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取_______进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_________(RASmRNA/RAS蛋白质)含最减少引起的。

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图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由___________连接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是___________末端，其产物长度为____________。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有___________种不同DNA片段。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加__________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是____________。

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