肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该

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肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

请回答：
(1)进行过程①时，需用______ 酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为_________。
(2)进行过程e时，需用________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，如let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取_______进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_________(RASmRNA/RAS蛋白质)含最减少引起的。

答案

(1)限制(限制性核酸内切)      启动子
(2)胰蛋白酶
(3)RNA      RAS蛋白质

举一反三

图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由___________连接。
(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是___________末端，其产物长度为____________。
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有___________种不同DNA片段。
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是____________。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加__________的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是____________。

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生物分子间的特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质-DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图。据图回答：

(1)过程①酶作用的部位是                键，此过程只发生在非结合区DNA，过程②酶作用的部位是                键。
(2)①、②两过程利用了酶的                 特性。
(3)若将得到的DNA片段用于构建重组质粒，需要过程③的测序结果与           酶的识别序列进行对比，已确定选用何种酶。
(4)如果复合体中的蛋白质为RNA酶聚合，则其识别、结合DNA序列位基因的                  。
(5)以下研究利用了生物分子间的特异性结合的有              (多选)
A．分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提rRNA
B．用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素
C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体定位
D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟。

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天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是[ ]
A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因B
B．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因B
C．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞
D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞

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下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是[ ]
A．分子杂交技术
B．抗原—抗体杂交
C．抗虫或抗病的接种实验
D．基因枪法

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用某人的胰高血糖素基因制成的DNA探针，检测下列物质，能形成杂交分子的是[ ]
A．该人的胰岛B细胞中的DNA
B．该人的胰岛A细胞的mRNA
C．该人的成熟红细胞中的DNA
D．该人的胰岛B细胞中的mRNA

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