下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有_

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下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，请回答下列问题：

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有_______个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越_____。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建***质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____。
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止____。
(5)为了获取***质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_____酶。
(6)***质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_______。
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将***质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_______的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

答案

(1)0、2
(2)高
(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
(5)DNA连接
(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞
(7)蔗糖为唯一含碳营养物质

举一反三

苏云金杆菌(Bt)能产生具有***虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。

(1)将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有_______种DNA片段。
(2)图中②表示HindⅢ与BamHⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得______种***质粒；如果换用BstⅠ与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得_______种***质粒。
(3)目的基因插入质粒后，不能影响质粒的______。
(4)图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T-DNA导入植物细胞，并防止植物细胞中_______对T-DNA的降解。
(5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞________。
(6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的_________基因频率的增长速率。

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采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的方法正确的是
①将毒素蛋白注射到棉受精卵中 ②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中 ③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒***，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒***，注射到棉的子房并进入受精卵[ ]
A．①②
B．②③
C．③④
D．①④

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天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精。请回答下列问题：
(1)将淀粉酶基因切割下来所用的工具是_______，用______将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子_______，以完成工程菌的构建。
(2)若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法是_____；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用______检测。将该工程菌接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定时间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈，请解释该现象发生的原因______。
(3)如何进一步鉴定不同的转基因工程菌菌株利用淀粉能力的大小？__________。
(4)微生物在基因工程领域中有哪些重要作用？________。

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下列不属于获取目的基因方法的是[ ]
A．利用DNA连接酶复制目的基因
B．利用DNA聚合酶复制目的基因
C．从基因文库中获取目的基因
D．利用PCR技术扩增目的基因

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下列获取目的基因的方法中需要模板链的是
①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成

[ ]

A．①②③④
B．①②③
C．②③④
D．②③

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