请问细胞活性的生理生化指标有哪些?

题目

请问细胞活性的生理生化指标有哪些?
我想测一下动物在正常饲养和饥饿状态下的细胞活性有什么不同?
请问有哪些反映细胞活性的生理生化指标

答案

细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素掺入法、MTT法等.其中MTT法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用.但MTT法形成的Formazan为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的Formazan,故有时重复性略差.为了解决这个问题,研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类：如XTT、CCK-8（WST-8）等.
现就这三种四氮唑盐类方法作一个简单介绍：
1.MTT法
MTT：化学名：3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名：噻唑蓝.检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲 （Formazan）并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲 ,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等.它的特点是灵敏度高、经济.
缺点：由于MTT经还原所产生的甲 产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲 的有机溶剂对实验者也有损害.
2.XTT法
XTT：化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide,作为线粒体脱氢酶的作用底物,被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲 产物.当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时,其所产生的水溶性的甲 产物的吸光度与活细胞的数量成正比.
优点：1、使用方便,省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高,甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT.
缺点：XTT水溶液不稳定,需要低温保存或现配现用.
3.CCK-8法或称WST-8法
CCK-8试剂中含有WST–8：化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐],它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲 产物（Formazan）.生成的甲 物的数量与活细胞的数量成正比.用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等.
优点：1、使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂；2、检测快速；3、灵敏度高,甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT；5、对细胞毒性小；6、为1瓶溶液,毋需预制,即开即用.
缺点:1、与MTT相比,CCK-8和XTT的价格比较贵.2、CCK-8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生漏加或多加.