对核酸进行限制性酶切时应注意什么?

题目

对核酸进行限制性酶切时应注意什么?

答案

影响限制性内切酶的因素：
DNA制品中的污染（蛋白质、酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS)
解决办法：
增加酶反应体积以稀释可能的抑制剂
增加酶作用单位(过多的甘油抑制酶活性)
延长反应时间 （1-16小时）
酶的星号活性*:改变酶切条件时酶的识别位点专一性下降的现象.
限制性内切酶识别特异性放宽.
EcoRⅠ在正常情况下识别GAATTC序列发生切割,但如果缓冲液中甘油浓度超过5%,其识别位点发生松动,可在AATT处发生切割,EcoRⅠ这种特殊的识别能力叫做星活性,用EcoRⅠ*表示.星活性可造成位点切割机率不等,降解不完全.
影响因素：甘油浓度12-20%,酶与DNA比例,离子强度,45%聚乙二醇(PEG),有机溶剂,8%二甲基亚枫,二价阳离子,12%乙醇.