我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个
题目
我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个
用什么方法.
答案
双酶切,然后做ligase连接就好.连接的过程中会出现很多突变.
然后你把连接的产物做转化.如果有条件可以使用电激转化,这个转化的效率非常点(连接产物本来就不多,突变又多).如果条件不够就用热激转化,热激转化的效率低一些,不如电激转化好.千万不要用TSS转化(效率太低了,只能用成型的质粒).
转化之后你要挑选菌落,去做测序(一般交给公司),因为突变很多,一定要测序到完全正确的序列.如果没有测到,就继续挑选菌落.如果菌落挑完了,就重新转化.这段时间要多扶老太太过马路哦.
等到你得到了好的菌落,就可以培养它,提取质粒.这个量就很大了.
给你个简单的protocol
PCR 你的基因
对PCR产物,和空质粒,同时使用双酶切(分开的),加入合适的NEBuffer
使用T4ligase 和Buffer 常温1小时或者16度过夜 连接.
热激转化(电激转化还有clean脱盐)
挑去菌落
提取DNA 测序(((得到了你要的哦)))
选定菌落,液氮保存
举一反三
已知函数f(x)=x,g(x)=alnx,a∈R.若曲线y=f(x)与曲线y=g(x)相交,且在交点处有相同的切线,求a的值和该切线方程.
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