pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带

题目

pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带
不管是扩gapdh,还是目的基因,都是只在100bpmarker下有一个条带,其他地方没有任何条带,扩的gapdh应该在200bp左右,RNA纯度分析每次结果都很好的,260/280都在2.0附近.pcr体系是50ul：10xbuffer 5ul Mgcl2 5ul 2.5的dNTPs 4ul 10umol/l的引物个1ul cDNA 2ul .94度 30秒 58度30秒 72度40秒 共40个循环.昨天换了新鲜组织刚扩了一个目的基因一个gapdh,两个都是只有一条100bp下的条带,且目的基因的这个条带比较粗亮.我该从哪里找问题?还有用的各种试剂-20度如果过了半年了,是不是已经过期?

答案

首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marker基因,但是你现在g...